來聊聊蛋白檢測(cè)類免疫層析法定性試劑注冊(cè)中的一個(gè)具體問題：在準(zhǔn)備技術(shù)要求附錄里的企業(yè)參考品時(shí)，到底需不需要把參考品的具體濃度值給附上？這個(gè)問題看似細(xì)節(jié)，但在注冊(cè)申報(bào)和產(chǎn)品質(zhì)量控制中非常關(guān)鍵。不同于病原體檢測(cè)試劑，蛋白類定性檢測(cè)對(duì)濃度的精密度要求更高，因?yàn)樗苯雨P(guān)系到臨床判讀的“陽(yáng)性”和“陰性”結(jié)果是否準(zhǔn)確可靠。網(wǎng)上對(duì)這個(gè)問題的討論也不少，核心都聚焦在法規(guī)要求和實(shí)際操作的可行性上。接下來，我就結(jié)合相關(guān)法規(guī)和審評(píng)要求，把這個(gè)事情給大家梳理清楚。

企業(yè)參考品的作用與構(gòu)成

企業(yè)參考品是啥？簡(jiǎn)單說，就是企業(yè)自己制備的，用于在研發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制過程中驗(yàn)證試劑性能的一套標(biāo)準(zhǔn)品。對(duì)于蛋白檢測(cè)類的免疫層析法定性試劑，這套參考品通常得包含幾個(gè)關(guān)鍵部分：陰性參考品、陽(yáng)性參考品和特異性參考品。陰性參考品用來驗(yàn)證試劑會(huì)不會(huì)把不該陽(yáng)性的樣本錯(cuò)判成陽(yáng)性（也就是假陽(yáng)性），它通常設(shè)置在臨界值附近一個(gè)比較低的濃度水平，專業(yè)上常叫C5濃度水平，意思是這個(gè)濃度下，理論上只有5%的檢測(cè)結(jié)果可能呈陽(yáng)性。陽(yáng)性參考品則是驗(yàn)證試劑能不能把該陽(yáng)性的樣本正確檢出（避免假陰性），它設(shè)置在臨界值附近一個(gè)比較高的濃度水平，叫C95濃度水平，意思是這個(gè)濃度下，理論上95%的檢測(cè)結(jié)果應(yīng)該是陽(yáng)性。特異性參考品呢，主要是看試劑會(huì)不會(huì)被其他可能存在于樣本里的物質(zhì)干擾，導(dǎo)致結(jié)果不準(zhǔn)。這三類參考品共同構(gòu)成了評(píng)估試劑分析性能的基礎(chǔ)。

法規(guī)對(duì)濃度值的要求

那么核心問題來了，在準(zhǔn)備這些參考品的技術(shù)要求附錄里，要不要寫明具體的濃度值呢？答案是：需要體現(xiàn)具體的濃度值。這個(gè)要求是有明確依據(jù)的。根據(jù)北京市藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《免疫層析法檢測(cè)試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)規(guī)范（2017版）》，以及北京市藥監(jiān)局在《北京市醫(yī)療器械審評(píng)檢查新300問》(中冊(cè))里的官方解答，都明確指出：該類型檢測(cè)試劑（指蛋白檢測(cè)類的免疫層析法定性檢測(cè)試劑）不同于某些病原體檢測(cè)試劑，其企業(yè)參考品（包括陰性參考品、陽(yáng)性參考品、特異性參考品等）在制備時(shí)，需要體現(xiàn)具體的濃度值。 為什么呢？因?yàn)榈鞍讬z測(cè)的定量屬性更強(qiáng)，其臨界值（Cut-off）的設(shè)置和驗(yàn)證對(duì)濃度的依賴性極高。C5和C95濃度點(diǎn)本身就是圍繞臨界值定義的（臨界值減少一定濃度≈C5，增加一定濃度≈C95），它們定義了試劑的“檢測(cè)灰區(qū)”。只有明確了這些濃度值，才能科學(xué)地驗(yàn)證試劑在臨界值附近的性能是否符合要求（例如，陰性參考品在C5濃度點(diǎn)的陰性符合率是否≥95%，陽(yáng)性參考品在C95濃度點(diǎn)的陽(yáng)性符合率是否≥95%）。 網(wǎng)上很多技術(shù)討論也強(qiáng)調(diào)了這一點(diǎn)，認(rèn)為濃度值的明確是保證性能驗(yàn)證可追溯、可重復(fù)的關(guān)鍵。

制備要求與信息呈現(xiàn)

明確了需要附濃度值，那具體怎么操作呢？首先，企業(yè)在配制這些參考品時(shí)，就要科學(xué)地確定目標(biāo)濃度。陰性參考品的目標(biāo)濃度應(yīng)設(shè)在臨界值附近的C5水平，陽(yáng)性參考品設(shè)在臨界值附近的C95水平。其次，在撰寫技術(shù)要求附錄的企業(yè)參考品部分時(shí)，應(yīng)明確列出每種參考品（陰性、陽(yáng)性、特異性）的具體目標(biāo)濃度值（或濃度范圍，但需說明其與臨界值/C5/C95的關(guān)系）。 這里要注意，雖然要求體現(xiàn)濃度值，但根據(jù)《免疫層析法檢測(cè)試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)規(guī)范（2017版）》，技術(shù)要求本身對(duì)臨界值的具體濃度水平體現(xiàn)不作強(qiáng)制要求（這是為了適應(yīng)當(dāng)時(shí)企業(yè)研發(fā)水平的現(xiàn)狀），但這并不意味著企業(yè)參考品的濃度值可以模糊不清。 企業(yè)在研究資料中必須詳細(xì)說明參考品的配制過程、原料來源（如使用的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、基質(zhì)類型）、賦值方法（如何確定其濃度值）以及穩(wěn)定性研究數(shù)據(jù)。如果參考品是企業(yè)自配的，這點(diǎn)尤其重要。 簡(jiǎn)單說，附錄里需要寫清楚濃度值，背后的支撐數(shù)據(jù)（配制方法、賦值依據(jù)）則放在研究資料中。

總結(jié)

該類型檢測(cè)試劑不同于病原體檢測(cè)試劑，企業(yè)參考品一般包括陰性參考品（臨界值附近C5濃度水平）、陽(yáng)性參考品（臨界值附近C95濃度水平）、特異性參考品等，需要體現(xiàn)具體的濃度值。企業(yè)在研制及注冊(cè)過程中可參考北京市藥品監(jiān)督管理局發(fā)布的《免疫層析法檢測(cè)試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)規(guī)范（2017版）》。總而言之，對(duì)于蛋白檢測(cè)類的免疫層析法定性試劑，在技術(shù)要求附錄的企業(yè)參考品制備部分，明確列出陰性參考品（C5濃度水平）、陽(yáng)性參考品（C95濃度水平）和特異性參考品的具體濃度值是法規(guī)和審評(píng)的明確要求。這直接關(guān)系到試劑在臨界值附近性能的科學(xué)驗(yàn)證和有效評(píng)價(jià)。企業(yè)在操作時(shí)，務(wù)必依據(jù)《免疫層析法檢測(cè)試劑（盒）產(chǎn)品技術(shù)審評(píng)規(guī)范（2017版）》等指導(dǎo)文件，同時(shí)確保研究資料能充分支持參考品的配制和賦值過程。